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1. 預(yù)期用途

世界衛(wèi)生組織（WHO；NIBSC 產(chǎn)品代碼 09/138）的生物標(biāo)準(zhǔn)化專家委員會 (ECBS) 于 2009 年建立了第一個 WHO 國際遺傳參考小組，用于定量 BCR-ABL1 mRNA [1]。該面板包括四個單獨編碼的標(biāo)準(zhǔn)/安瓿，每個都包含凍干細(xì)胞。每個標(biāo)準(zhǔn)在國際標(biāo)準(zhǔn) (BCR-ABLIS) 上對 BCR-ABL1 有不同的定義值，具體取決于使用的對照基因。

它們一起用作校準(zhǔn)試劑盒、測定和二級標(biāo)準(zhǔn)的主要標(biāo)準(zhǔn)（參見第 7 節(jié)）。

這些材料不得用于任何其他用途。請注意，這些材料僅在國際標(biāo)準(zhǔn) (IS) 的 0.01% 至 10% 范圍內(nèi)驗證了 BCR-ABL1 mRNA 檢測。它們尚未針對其他直接應(yīng)用進(jìn)行驗證，例如IS 測量值 >10%，或直接確定測定靈敏度<0.01%，盡管這些可以通過衍生二級標(biāo)準(zhǔn)來確定（參見第 7 節(jié)）。這些材料包含 BCR-ABL1 e14a2 轉(zhuǎn)錄本（也稱為 b3a2）；應(yīng)在使用前驗證它們對最終用戶分析中其他轉(zhuǎn)錄物（包括 BCR-ABL1 e13a2 (b2a2) 的量化）的適用性，例如通過確保對轉(zhuǎn)錄物進(jìn)行同樣有效的 PCR 擴(kuò)增。

NIBSC 09/138 BCR-ABL1易位的定量(標(biāo)準(zhǔn)品)

2. 注意

該制劑不適用于人類食物鏈中的人類或動物。該制劑含有人類來源的材料。已通過 PCR 檢測了它們的 HIV、HBV、HCV、CMV、EBV、HTLV-I/II、HHV-8 和支原體，但均未檢測到。

對自由干燥材料的常規(guī)微生物學(xué)測試表明溶血性葡萄球菌污染，屬于危險組 2。在 NIBSC 進(jìn)行的實驗表明，

有機(jī)體在暴露于 Trizol（30-60% 苯酚）后被完全殺死，這是 RNA 提取過程的第一步。與所有生物來源的材料一樣，這種制劑應(yīng)被視為對健康有潛在危害。它應(yīng)該被使用和丟棄根據(jù)您自己實驗室的安全程序。此類安全程序應(yīng)包括戴防護(hù)手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時應(yīng)小心謹(jǐn)慎，以免割傷。

3. 單元

該小組在一項涉及 10 個實驗室的國際合作研究中進(jìn)行了測試，并使用三種經(jīng)常使用的對照基因為 4 種主要標(biāo)準(zhǔn)中的每一種獲得了以下平均 BCR-ABL1IS 值。

4. 內(nèi)容

生物材料原產(chǎn)國：德國和英國。安瓿含有不同比例的凍干 K562 細(xì)胞（表達(dá) BCR-ABL1 易位 e14a2，也稱為 b3a2）和 HL60 細(xì)胞（BCR-ABL1 陰性）。每個安瓿的細(xì)胞總數(shù)約為 1.5 x 10e6。在冷凍干燥之前，將細(xì)胞懸浮在 2x PBS 中。

下表顯示了每種材料的估計 RNA 產(chǎn)量。請注意，這些值僅供參考，不用于正式用途

5。貯存

將所有未開封的安瓿瓶存放在 -20°C 或以下。請注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，NIBSC 可能會在環(huán)境溫度下運輸這些材料。

6. 開瓶指南

DIN 安瓿瓶有一個“易開”顏色的壓力點，窄的安瓿桿在此與較寬的安瓿瓶主體相連。各種類型的安瓿破碎機(jī)可商購獲得。要打開安瓿，輕輕敲擊安瓿以收集底部（標(biāo)記）端的材料，并按照安瓿破碎器隨附的制造商說明進(jìn)行操作。

NIBSC 09/138 BCR-ABL1易位的定量(標(biāo)準(zhǔn)品)

7. 材料的使用

在重新配制之前，不應(yīng)嘗試稱量凍干材料的任何部分。

在繼續(xù)之前，請閱讀第 3-5 頁上的建議測定和二級標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)方法。如果您要校準(zhǔn)二級標(biāo)準(zhǔn)，請在與一級標(biāo)準(zhǔn)同時提取 RNA、制備 cDNA 和測試該 cDNA。這將使您能夠確定二級標(biāo)準(zhǔn)的 IS 值。

a。如上文第 6 節(jié)所述打開安瓿瓶。

b。在室溫下使用 1ml Trizol、600 μl RLTbuffer 或其他 RNA 提取系統(tǒng)的等價物重構(gòu)每種凍干材料。

C。確保用移液器吸頭或針頭反復(fù)抽吸來裂解所有細(xì)胞。孵育 5 分鐘。

d。將每個安瓿的全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到無核酸酶管中。

e.使用常用方法從 4 種材料中的每一種中提取 RNA。

F。使用常用方法為 4 種 RNA 材料中的每一種制備 cDNA。 （如果按照建議的方法，從每種 RNA 材料中制備 2 批 cDNA；見第 3 頁）。

G。使用常用方法確定 cDNA 材料的 % BCR-ABL1 / 對照基因值。

H。 通過分析這些材料的觀察值與預(yù)期值，確定用于報告 IS 的 BCR-ABL1 測定的校正因子。